我们做了一些实验，发现并不是缺一不可，反而是缺一更可了，还发现，这两个结构域去掉其中一个之后，另一个具有脱氨活性的结构域的碱基转化率反而更高了，我们就把它定义为胞嘧啶脱氨酶抑制（dCDI）结构域，后续我们也筛选了不同物种双结构域的胞嘧啶脱氨酶，发现来源于小鼠的APOBEC3，其第二个结构域的抑制脱氨活性是最强的，我们把它定义为最终tBE当中使用的胞嘧啶脱氨酶抑制结构域。让它变成一个锁，牵制住碱基编辑器在脱靶位点的突变作用。
难点在于如何保证系统当中的钥匙，就是TEV酶只会在靶向位点进行解锁，而不会在脱靶位点解锁，我们尝试了很多种方法，发现只有当TEV酶被拆开，其中一个半端被招募，而另外一个半端处于完全游离的状态，这种情况下才有更高的特异性。
未来百科：你们这项最新研究使用了双载体腺相关病毒，这么做的原因和难点是什么呢？
王丽洁：AAV病毒现在已经被广泛用作基因治疗递送载体了，但是它有一个特点，就是单个AAV载体都有一个4.7kbp的基因包装上限，也就是需要递送的基因长度超过4.7kbp，AAV载体就装载不了了。但大部分传统的碱基编辑器，采用的是APOBEC与nCas9融合蛋白，它远远超过了单个AAV载体的装载上限，这就需要将碱基编辑器拆分成两个部分来分别放到两个AAV载体上。
tBE是由天然的两个载体构成，就是说APOBEC和nCas9天然就是分开的，它打破了传统的构型，并且每个结构都没有超过单个AAV载体的装载上限，那么它就可以被非常便利地装载进双AAV系统当中进行体内的递送，当然这不是说我们一开始就是这么设计的，而是我们在后期鉴定tBE系统能否进行体内（in vivo）碱基编辑时惊喜地发现它刚好可以这样通过双AAV载体递送。
未来百科：在科研的过程中，可能每天都会经历从boring到失望再到惊喜的过程，如何调整自己的心态？
王丽洁：实验失败其实是一件非常常见的事情，我的建议是用平常心去做每一个实验，这样最后的收获就会比一开始预想的要多一些。实验结果与预期不符其实也并不是一件很糟糕的事情，有的时候可能还会带来一些新的思路和方向。
未来百科：正序生物其他专利的碱基编辑器、技术原理，还有各自的优劣势有哪些呢。
