2.采血：止血带结扎时间应小于1分钟，如超过2分钟，大静脉血流受阻而使毛细血管内压增高，使分子质量＜5000的物质逸入组织液，或缺氧引起血液成分的变化，使检查结果增高或减低。
3.溶血：因容器不洁、接触水、强力振荡、操作不慎等可引起溶血，使红细胞计数、血细胞比容、血浆或血清化学成分（如钾、镁、转氨酶、胆红素）等多项指标检验结果发生变化。
4.样本处理：血液样本采集后应立即送检，并尽快进行检查，样本保存不当直接影响实验结果。血浆在4℃保存24h后，某些凝血因子活性减少95%。低温（4℃）保存血液可使血小板计数结果减低。因此，应根据实验项目确定最佳的保存条件。
5.实验结果分析：分析结果时，应考虑药物、饮食等因素对结果的影响。同时，应密切结合临床。
三、抗凝剂选择
1.乙二胺四乙酸（EDTA）盐
常用有钠盐或钾盐。
①抗凝原理：螯合钙离子。
②使用方法：量为1.5～2.2mg/ml血液。
③适用范围：对血细胞形态、血小板计数影响很小。
根据国际血液学标准化委员会（ICSH）建议，CBC抗凝剂用EDTA-K2。不适于凝血检查、血小板功能试验。
2.草酸盐
①抗凝原理：草酸钙沉淀。
②适用范围 双草酸盐
血细胞比容、CBC、网织红细胞计数等检查。
不适于血小板计数、白细胞分类计数。 3.肝素
①抗凝原理：
加强抗凝血酶（AT）灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，并阻止血小板聚集等作用，从而阻止血液凝固。
②使用方法：每毫升血液肝素用量为（15±2.5）U，多为肝素钠盐或钾盐。
③适用范围：红细胞渗透脆性试验。
不适于CBC、细胞形态学检查。 4.枸橼酸盐
①抗凝原理：能与血液中钙离子结合形成螯合物。
②使用方法：配成109mmol/L的浓度。
1:9------凝血
1:4------红细胞沉降率
③适用范围：凝血检查、红细胞沉降率、输血保养液。
四、血液涂片制备
一张良好的血片
①厚薄适宜
②头体尾明显
③细胞分布均匀
④血膜边缘整齐
⑤并留有一定空隙
血涂片的制备
①手工推片法 25°～30°夹角
血滴大小、推片与载玻片间夹角、推片速度、血细胞比容。 ②厚血膜涂片法 疟原虫、微丝蚴等。
五、血液细胞染色
瑞氏染色法
1.染料组成
染料组成
酸性染料伊红（E-） 钠盐 阴离子
碱性染料亚甲蓝（M＋） 氯盐 阳离子
将适量伊红、亚甲蓝溶解在甲醇中。
甲醇的作用：一是溶解亚甲蓝和伊红；二是固定细胞形态。
2.染色原理 物理吸附与化学亲和作用
③中性颗粒 呈等电状态与E-和M 结合→淡紫红色
④红细胞
原始红细胞、早幼红细胞胞质、核仁，染成较浓厚的蓝色；中幼红细胞既含酸性物质，又含碱性物质，染成红蓝色或灰红色；完全成熟红细胞，酸性物质彻底消失后，染成粉红色。 3.pH值的影响
细胞各种成分均属蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液pH而定，在偏酸性环境中正电荷增多，易与伊红结合，红细胞和嗜酸性粒细胞染色偏红，细胞核呈淡蓝色或不染色；在偏碱性环境中负电荷增多，易与美蓝结合，所有细胞呈灰蓝色，颗粒呈深暗，嗜酸性颗粒呈暗褐，甚至棕黑色，中性颗粒偏粗，呈紫黑色。
①pH＜pI→Pr带正电荷多→易与E-结合→染色偏红
②pH＞pI→Pr带负电荷多→易与M 结合→染色偏蓝
磷酸盐缓冲液（pH6.4～6.8）
保证细胞受色时恒定最佳pH条件 4.注意事项
（1）血涂片干透后固定，否则细胞在染色过程中容易脱落。
（2）冲洗时应以流水冲洗，不能先倒掉染液，以防染料沉着在血涂片上。冲洗时间不能过久，以防脱色。如血涂片上有染料颗粒沉积，可滴加甲醇，然后立即用流水冲洗。
